Conhecimentos de Base Recomendados

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Objetivos

No final da unidade curricular, é esperado que os estudantes tenham adquirido conhecimentos teóricos sobre a função e estrutura das biomoléculas pertencentes às quatro classes mais representativas, tais como ácidos nucleicos (ARN e ADN), glícidos, lípidos e proteínas, e possuirem noções sobre cinética enzimática e ensaios enzimáticos.
Para além da aquisição dos conhecimentos teóricos os estudantes deverão saber aplicá-los em contexto laboratorial, incluindo a preparação de soluções tampões típicas para ensaios bioquímicos, técnicas de purificação de biomoléculas por meio de cromatografia e ultrafiltração, técnicas de doseamento de biomoléculas (como glícidos, proteínas e ácidos nucleicos) dominando métodos colorimétricos e análises espetrofotométricas, técnicas analíticas para separação de proteínas por meio de eletroforese em gel de acrilamida, e métodos de análise e doseamento baseados em ensaios enzimáticos diretos e indiretos.

Métodos de Ensino

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Estágio(s)

Não

Programa

Conteúdos Teóricos:
1. Biodiversidade dos organismos vivos; diferentes tipos de células e suas características
2. Função e estrutura das biomoléculas: proteínas, ácidos nucleicos (ARN e ADN), glícidos, lípidos.
3. Síntese Proteica (transcrição e tradução)
4. Cinética enzimática (atividade enzimática específica, cinética de Michaelis Menten, ensaios enzimáticos)
Conteúdos de Aplicação Laboratorial
1. Métodos espetrofotométricos: doseamento de ácidos nucleicos ou proteínas por absorção de ultravioleta (UV) e por métodos colorimétricos quantitativos.
2. Métodos preparativos de separação de biomoléculas:
• Diálise; centrifugação, ultracentrifugação e centrifugação em gradiente.
• Técnicas de filtração e ultrafiltração e métodos cromatográficos: Interação hidrofóbica, de permuta iónica, de afinidade e exclusão molecular. Aplicação no isolamento e purificação de proteínas e ácidos nucleicos.
• Métodos eletroforéticos. Separação de proteínas em gel SDS-PAGE e de ácidos nucleicos em gel de agarose.
3. Determinação de atividade enzimática específica e dos parâmetros cinéticos de Michaelis Menten. Determinação de atividade enzimática e métodos de quantificação através de ensaios enzimáticos diretos e indiretos.

Demonstração de conteúdos

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Demonstração da metodologia

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Docente(s) responsável(eis)

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Bibliografia

Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2022). Princípios de bioquímica de Lehninger. Artmed Editora. (https://www.researchgate.net/publication/48376766_Lehninger_Principles_of_Biochemistry)

Berg, J. M., Tymoczko, J. L., & Stryer, L. Biochemistry 2006 WH Freeman and Company. New York.
(https://biokamikazi.files.wordpress.com/2013/10/biochemistry-stryer-5th-ed.pdf)

Quintas, A., Freire, A. P., & Halpern, M. J. (2008). Bioquímica, Organização Molecular da Vida. Lisboa: Lidel. ISBN: 978972757431

Voet, D., & Voet, J. G. (2010). Biochemistry John Wiley & Sons. Inc., 0-471-58651-x, New York. ISBN: 978-0470570951